ในด้านการวินิจฉัยระดับโมเลกุล ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR) ถือเป็นมาตรฐานทองคำสำหรับการตรวจหากรดนิวคลีอิกมายาวนาน ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา เทคโนโลยีการขยายอุณหภูมิแบบไอโซเทอร์มอล ซึ่งแสดงโดย recombinase polymerase amplification (RPA) ได้รับความสนใจเพิ่มขึ้นเนื่องจากความเร็ว ความเรียบง่าย และความเหมาะสมสำหรับ-การทดสอบที่ไซต์งาน
แม้ว่าทั้ง PCR และ RPA จะเป็นวิธีการขยายกรดนิวคลีอิก แต่ก็มีหลักการทำงาน ข้อกำหนดของอุปกรณ์ และสถานการณ์การใช้งานที่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ ทำให้แต่ละเทคโนโลยีเหมาะสมกับความต้องการในการวินิจฉัยที่แตกต่างกัน
1. หลักการหลัก: วงจรความร้อนเทียบกับค่าคงที่- การขยายอุณหภูมิ
PCR เป็นกระบวนการทางชีวเคมีที่สามารถขยายโมเลกุล DNA เดี่ยวให้เป็นล้านสำเนาภายในระยะเวลาอันสั้น ปฏิกิริยาอาศัยการหมุนเวียนด้วยความร้อนซ้ำๆ และประกอบด้วยสามขั้นตอนหลัก:
1. การสูญเสียสภาพธรรมชาติ (90–95 องศา ) – DNA ที่มีเกลียวคู่-ถูกแยกออกเป็นเกลียวเดี่ยว
2.Annealing (55–65 องศา ) – ไพรเมอร์จับกับลำดับเป้าหมาย
3.ส่วนขยาย (72 องศา ) – DNA polymerase สังเคราะห์สาย DNA ใหม่
ด้วยวงจรการควบคุมอุณหภูมิ-เหล่านี้ DNA เป้าหมายจะถูกขยายแบบทวีคูณด้วยความแม่นยำสูง อย่างไรก็ตาม PCR ต้องใช้เครื่องมือการหมุนเวียนความร้อนที่ซับซ้อน และโดยทั่วไปจะใช้เวลา 1-2 ชั่วโมงจึงจะเสร็จสมบูรณ์
ในทางตรงกันข้าม RPA ทำงานที่อุณหภูมิคงที่ 37–42 องศา ทำให้สามารถขยายกรดนิวคลีอิกได้อย่างรวดเร็วโดยไม่ต้องหมุนเวียนด้วยความร้อน เทคโนโลยีนี้อาศัยการทำงานร่วมกันของโปรตีนรีคอมบิเนส โปรตีนที่จับกับ DNA -สายเดี่ยว- และสาย-แทนที่ DNA polymerase เพื่อให้ได้การขยายเป้าหมายที่มีความจำเพาะสูงภายใต้สภาวะอุณหภูมิคงที่
DNA polymerase ที่ใช้ใน RPA มีกิจกรรมการแทนที่เกลียว แต่ไม่มีกิจกรรม exonuclease 5' → 3' ในระหว่างการขยายเสียง ไพรเมอร์ด้านนอกจะขยายไปตามเกลียวเทมเพลต เมื่อพบบริเวณที่มีเกลียวคู่-ที่สังเคราะห์จากไพรเมอร์ด้านใน โพลีเมอเรสไม่สามารถย่อยสลายเกลียวที่อยู่ปลายน้ำและแทนที่มัน ทำให้เกิดผลิตภัณฑ์เครื่องขยายสัญญาณชนิดใหม่
ปฏิกิริยาทั้งหมดเสร็จสิ้นภายใต้อุณหภูมิคงที่ ทำให้ไม่จำเป็นต้องใช้เครื่องมือที่ซับซ้อน และช่วยให้สามารถ-ดูแล-การดูแลและ-การทดสอบภาคสนามได้อย่างแท้จริง ด้วยการรวมเอา Reverse transcriptase เข้าด้วยกัน RPA ยังสามารถนำไปใช้กับการตรวจจับเป้าหมาย RNA ได้อีกด้วย
ผลลัพธ์การขยายสามารถวิเคราะห์ได้โดยใช้รูปแบบการอ่านข้อมูลหลายรูปแบบ รวมถึงการตรวจจับจุดสิ้นสุด การตรวจสอบ-การเรืองแสงแบบเรียลไทม์ การทดสอบการไหลด้านข้าง และสามารถบูรณาการเพิ่มเติมกับระบบ CRISPR-Cas, ไมโครฟลูอิดิกส์ หรือ-ลำดับการสร้างลำดับถัดไป (NGS) สำหรับการพัฒนาการทดสอบขั้นสูง
สถานการณ์การใช้งาน: ความแม่นยำในห้องปฏิบัติการเทียบกับ-การทดสอบอย่างรวดเร็วของไซต์
PCR ได้กลายเป็นหนึ่งในเทคโนโลยีการวินิจฉัยระดับโมเลกุลที่มีคุณค่ามากที่สุด และยังคงเป็นมาตรฐานทองคำสำหรับการทดสอบกรดนิวคลีอิก
เนื่องจากความแม่นยำสูง -ประสิทธิผลด้านต้นทุน และความสามารถในการปรับขนาด PCR จึงถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการวินิจฉัยทางคลินิก ห้องปฏิบัติการแบบรวมศูนย์ สถาบันการวิจัย และ-โครงการคัดกรองขนาดใหญ่ ซึ่งมีโครงสร้างพื้นฐานและบุคลากรที่ได้รับการฝึกอบรมพร้อมให้บริการ
ในทางกลับกัน RPA มีข้อดีที่ชัดเจนในการวินิจฉัยไซต์-อย่างรวดเร็ว ด้วยการขยายเสียงเสร็จสมบูรณ์ในเวลาเพียง 20 นาที ความต้องการอุปกรณ์ขั้นต่ำ และการใช้งานที่เรียบง่าย RPA จึงเหมาะอย่างยิ่งสำหรับ
- การตั้งค่าการดูแลสุขภาพเบื้องต้นและเหตุฉุกเฉิน
- ด่านศุลกากรและตรวจชายแดน
- คัดกรองโรคสัตว์และพืชภาคสนาม
- การทดสอบความปลอดภัยด้านสิ่งแวดล้อมและอาหาร
เมื่อใช้ร่วมกับอุปกรณ์พกพาและแถบไหลด้านข้าง RPA ช่วยให้การทดสอบระดับโมเลกุลภายนอกห้องปฏิบัติการแบบดั้งเดิมรวดเร็วและเชื่อถือได้
MIRA (การขยายอย่างรวดเร็วของไอโซเทอร์มอลมัลติเอนไซม์)เป็นเทคโนโลยีขยายเสียงแบบอุณหภูมิคงที่ที่เป็นเอกสิทธิ์ของ Amp Future เป็นของครอบครัวทางเทคนิคเดียวกันกับ RPA และได้รับแรงบันดาลใจจากกลไกการรวมตัวกันใหม่และซ่อมแซม DNA ตามธรรมชาติ โดยใช้เอนไซม์ที่ทำงานหลายอย่างเพื่อให้เกิดการขยายกรดนิวคลีอิกอย่างรวดเร็วภายใต้อุณหภูมิคงที่
MIRA ใช้ระบบที่ประสานกันของเอนไซม์หลักห้าชนิด ซึ่งรวมถึงเฮลิเคส รีคอมบิเนส โปรตีนที่จับกับ DNA -สายเดี่ยว- และดีเอ็นเอโพลีเมอเรส เพื่อเปิดใช้งาน:
- ช่วงอุณหภูมิการทำงานกว้าง: 25 องศา –45 องศา
- การขยายอย่างรวดเร็ว: ผลลัพธ์ภายใน 20 นาที
- ความไวและความจำเพาะสูง
- เพิ่มความปลอดภัยและลดความเสี่ยงในการปนเปื้อน
MIRA เป็นเทคโนโลยีการขยายกรดนิวคลีอิกที่ออกแบบมาโดยเฉพาะสำหรับการทดสอบจริงบน-ไซต์และจุด-ของ-การดูแล
Amp Future สร้างขึ้นบนแพลตฟอร์ม MIRA โดยได้พัฒนากลุ่มผลิตภัณฑ์ที่ครอบคลุมสำหรับ POCT ระดับโมเลกุลที่รวดเร็ว ซึ่งรวมถึง:
สารปล่อยกรดนิวคลีอิกอย่างรวดเร็ว:
ได้รับกรดนิวคลีอิกที่ขยายได้ภายใน 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง การยับยั้งต่ำ ช่วยให้สามารถโหลดตัวอย่างได้เต็มที่สูงสุดถึง 50 μL; การขนส่งและการเก็บรักษาที่อุณหภูมิห้อง ไม่จำเป็นต้องป้องกันแสง
รีเอเจนต์การขยายกรดนิวคลีอิกไอโซเทอร์มอล:
การขยายเสียงเสร็จสิ้นภายใน 5-20 นาที รวดเร็วและมีประสิทธิภาพ รูปแบบรีเอเจนต์ต่างๆ (ผงไลโอฟิไลซ์, ไมโครสเฟียร์ไลโอฟิไลซ์ ฯลฯ ); วิธีการนำเสนอผลลัพธ์ต่างๆ (อิเล็กโทรโฟเรซิส, การเรืองแสง, แถบทดสอบ)
อุปกรณ์พกพาขนาดเล็ก:
เครื่องตรวจจับอุณหภูมิคงที่แบบดิจิทัล เครื่องมือทดสอบขนาดพกพา- ถือได้ง่ายด้วยมือเดียว พร้อมด้วยแบตสำรอง ช่วยให้คุณหลุดพ้นจากข้อจำกัดของห้องปฏิบัติการ และนำการทดสอบกรดนิวคลีอิกที่แม่นยำสู่ภาคสนาม
แถบทดสอบเดี่ยว/หลายแผ่น:
ปรับให้เหมาะสมตามวิธีการ MIRA เพื่อความเข้ากันได้ที่ดีขึ้น ผสานกับเทคโนโลยี MIRA เน้นความสะดวกสบาย
เครื่องวิเคราะห์การขยายกรดนิวคลีอิกอัตโนมัติเต็มรูปแบบ:
ต้องการการโหลดตัวอย่างเพียงครั้งเดียวเพื่อการตรวจจับอัตโนมัติเต็มรูปแบบ ขีดจำกัดการตรวจจับเหลือเพียงสำเนาเดียว การขยายอุณหภูมิคงที่และการปิดฝาอัตโนมัติช่วยลดความเสี่ยงของการปนเปื้อน
บน-แพ็คเกจการทดสอบอย่างรวดเร็วของไซต์:
การทดสอบเฉพาะจุด-ทุกที่ทุกเวลา ทั้งหมดในแพ็คเกจเดียว ทดสอบเสร็จภายใน 30 นาที แม่นยำและละเอียดอ่อน
หากต้องการข้อมูลผลิตภัณฑ์หรือแนวทางแก้ไขเพิ่มเติม โปรดติดต่อเรา