ระบบ RPA-CRISPR/Cas12a ในการศึกษานี้บรรลุการตรวจจับ HCMV ที่มีความละเอียดอ่อน- ความไวเป็นพิเศษ (1 สำเนา/μL) อย่างรวดเร็ว (30–40 นาที) โดยการกำหนดเป้าหมายยีน UL123 ที่แสดงออกตั้งแต่เนิ่นๆ ซึ่งมีประสิทธิภาพเหนือกว่าวิธีทั่วไปในการทดสอบตัวอย่างทางคลินิก นวัตกรรมนี้ช่วยให้สามารถวินิจฉัยการติดเชื้อไวรัส- ที่มีปริมาณต่ำ-ได้ทันท่วงที โดยเฉพาะอย่างยิ่งในผู้ป่วยที่มีภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่อง และ ตอกย้ำความเป็นไปได้ของการวินิจฉัยโดยใช้ CRISPR- เพื่อปรับปรุงการจัดการโรคที่เกี่ยวข้องกับ HCMV ความเรียบง่ายและประสิทธิภาพของการทดสอบเน้นย้ำศักยภาพของการทดสอบในฐานะ-เครื่องมือดูแล{15}}จุดสำหรับการตั้งค่าที่จำกัดทรัพยากร{16}}
รูปแบบของไซต์ขยาย RPA และการเลือกชุดอุปกรณ์
(A) การออกแบบไพรเมอร์ RPA เกี่ยวกับตำแหน่งของชิ้นส่วนขยายสัญญาณ ลูกศรระบุตำแหน่งฐานตั้งแต่จุดเริ่มต้นจนถึงจุดสิ้นสุดของชิ้นส่วนที่ขยายด้วยไพรเมอร์ P1-P6
(B) ภาพ agarose gel electrophoresis ของผลิตภัณฑ์ RPA ที่ถูกขยายด้วยชุดไพรเมอร์ HCMV 6 ชุด
(C) การคัดกรองประสิทธิภาพการขยายของชุด RPA จากบริษัทต่างๆ P: ไพรเมอร์, NC: การควบคุมเชิงลบ
ผลลัพธ์ระบุว่าชุด AmpFuture มีประสิทธิภาพการขยายเสียงสูงสุด
การเปรียบเทียบอัตราบวกของ MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - Fluorescent Probe Method และ qPCR ในตัวอย่างทางคลินิก
เราเก็บตัวอย่างเลือดและปัสสาวะจากผู้ป่วยทางคลินิก 48 ราย จีโนมดีเอ็นเอถูกสกัดจากตัวอย่างเหล่านี้โดยใช้ชุด TIANamp Genomic DNA Kit และผลลัพธ์ของการตรวจจับ UL122 ได้รับการวิเคราะห์ผ่าน PCR- วิธีการโพรบฟลูออเรสเซนต์ เมื่อเปรียบเทียบผลลัพธ์ของเรากับการวินิจฉัยทางคลินิก วิธีการของเราระบุตัวอย่างที่เป็นบวก 6 ตัวอย่างซึ่งเป็นผลลบในการทดสอบทางคลินิก
