การตรวจหา chaphamaparvovirus ของแมวที่มองเห็นได้และรวดเร็วโดยใช้การขยายอย่างรวดเร็วของอุณหภูมิคงที่แบบหลายเอนไซม์และการทดสอบก้านวัดการไหลด้านข้าง
วารสาร:พรมแดนทางจุลชีววิทยาเซลล์และการติดเชื้อ
ปัจจัยผลกระทบ:4.6
ชาฟามาพาร์โวไวรัสในแมว(FeChPV)เป็นพาร์โวไวรัสชนิดใหม่ ซึ่งตรวจพบครั้งแรกในแมวที่มีอาการท้องร่วงในแคนาดาเมื่อปี 2562 ลักษณะการก่อโรคและลักษณะโมเลกุลยังไม่ชัดเจน และยังแสดงโฮสต์และความหลากหลายทางพันธุกรรม ซึ่งต้องมีการตรวจสอบทางระบาดวิทยาเพิ่มเติม ปัจจุบันยังไม่มีวิธีการมาตรฐานในการตรวจจับ FeChPV
วิธีการขยายอย่างรวดเร็วโดยไอโซเทอร์มอลหลายเอนไซม์-ก้านวัดการไหลด้านข้าง (MIRA-LFD)ถูกนำมาใช้อย่างประสบความสำเร็จในการตรวจจับไวรัสต่างๆ โดยมีข้อดี เช่น ความรวดเร็ว ความเรียบง่าย และไม่ต้องใช้เครื่องมือที่มีความแม่นยำ ทีมวิจัยได้กำหนดวิธี MIRA-LFD ที่เหมาะสมสำหรับ FeChPV เพื่อจัดการกับความท้าทายในการตรวจหาทางคลินิกระดับรากหญ้า โดยไม่ต้องพึ่งเครื่องมือที่มีความแม่นยำวิธี MIRA-LFD ตรวจพบ FeChPV สำเร็จที่ 37 องศาภายใน 20 นาที และไม่แสดงปฏิกิริยาข้าม-กับไวรัสอื่นๆ ขีดจำกัดการตรวจจับคือ 32.3 ชุด/ไมโครลิตรสูงกว่าวิธี PCR ถึง 10 เท่า นอกจากนี้ วิธี MIRA-LFD ตรวจพบตัวอย่างที่เป็นบวก 29 FeChPV- ในแมวที่เป็นโรคท้องร่วง 417 ตัว โดยมีอัตราผลเป็นบวกสูงกว่าวิธี PCR แบบซ้อนเล็กน้อย ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าวิธี MIRA-LFD ที่จัดตั้งขึ้นสำหรับการตรวจจับ FeChPV นั้นเป็นวิธีการที่มีประสิทธิภาพ ประหยัด เชื่อถือได้ และเรียบง่าย ซึ่งมีส่วนช่วยในการป้องกันและควบคุมการติดเชื้อ FeChPV ได้ตั้งแต่เนิ่นๆ
1.วิธีการทดลอง
ตัวอย่างทางคลินิก:ตัวอย่างไม้กวาดทางทวารหนักที่ใช้ในการศึกษานี้รวบรวมจากแมว 632 ตัว (แบ่งเป็นแมว 417 ตัวที่มีอาการท้องร่วง และแมวที่มีสุขภาพดี 115 ตัว) และสุนัข 474 ตัว (ในนั้นเป็นสุนัขที่มีอาการท้องร่วง 342 ตัว และสุนัขที่มีสุขภาพดี 132 ตัว) ที่คลินิกสัตวแพทย์ในกวางตุ้ง เหอหนาน อานฮุย มณฑลเจ้อเจียง และเขตปกครองตนเองมองโกเลียใน ระหว่างปี 2022 ถึง 2024
การขยายกรดนิวคลีอิก:เติมกรดนิวคลีอิก DNA ที่สกัดแล้วลงในระบบ MIRA รีคอมบิเนสและไพรเมอร์ก่อตัวเป็นสารเชิงซ้อน ด้วยความช่วยเหลือของโปรตีนเสริมและโปรตีนที่จับกับสายเดี่ยว- พวกมันบุกรุกแม่แบบ-ดีเอ็นเอสายคู่ ไพรเมอร์จับกับบริเวณคู่สมที่คล้ายคลึงกันเพื่อสร้างบริเวณลูป D- ในขณะที่รีคอมบิเนสแยกชิ้นส่วนออกจากสารเชิงซ้อน โพลีเมอเรสจับกับปลาย 3 ฟุตของไพรเมอร์และเริ่มการสังเคราะห์ DNA โดยขยายขอบเขตเป้าหมายบนเทมเพลตแบบทวีคูณ กระบวนการนี้หมุนเวียนอย่างรวดเร็วและมีประสิทธิภาพ จึงสามารถบรรลุ-การขยายส่วนเป้าหมายที่รวดเร็วเป็นพิเศษในเวลาเพียง 15 นาที
การพัฒนาสีของแถบทดสอบ:ผลิตภัณฑ์ขยายกรดนิวคลีอิกถูกเจือจาง 1:10 นำไปใช้กับแถบทดสอบ และอ่านผลลัพธ์หลังจากผ่านไป 5 นาที
กระบวนการทั้งหมดตั้งแต่การขยายกรดนิวคลีอิกไปจนถึงการพัฒนาสีของแถบทดสอบใช้เวลาเพียง 20 นาที
มีการใช้ผลิตภัณฑ์ชีวภาพในอนาคตของแอมป์-ในการทดลอง:
ในการศึกษานี้ ชุดโพรบไพรเมอร์เฉพาะ-ที่ได้รับการออกแบบสี่ชุดได้รับการคัดกรอง ใช้ทั้งแถบทดสอบ agarose gel electrophoresis และกรดนิวคลีอิกในการนำเสนอผลลัพธ์ ไพรเมอร์ทั้งสี่ชุด-สามารถตรวจพบไวรัส FeChPV ได้ ตามผลลัพธ์ของอะกาโรสเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส ชุดค่าผสม FeChPV-4 แสดงแถบเป้าหมายที่สว่างที่สุด ดังนั้นจึงเลือกชุดค่าผสมนี้สำหรับการทดสอบครั้งต่อไป
จากผลการตรวจด้วยเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสของอะกาโรส การขยายเวลา 5, 10, 15 และ 20 นาทีทั้งหมดจะให้ผลในย่านความถี่เป้าหมาย ความเข้มของแถบเป้าหมายสูงสุดที่ 15 นาทีของการขยายสัญญาณ โดยกำหนดให้ 15 นาทีเป็นเวลาปฏิกิริยาที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการสอบวิเคราะห์นี้ การขยายที่ 36 องศา , 37 องศา , 38 องศา , 39 องศา และ 40 องศา ล้วนสร้างย่านความถี่เป้าหมาย โดยมีแถบสว่างที่สุดที่สังเกตได้ที่ 39 องศา ทำให้ 39 องศาเป็นอุณหภูมิปฏิกิริยาที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการทดสอบนี้
(รูป A: 1: การขยาย 5 นาที 2: การขยาย 10 นาที 3: การขยาย 15 นาที 4: การขยาย 20 นาที) (รูป B: 1: การขยาย 36 องศา 2: การขยาย 37 องศา 3: การขยาย 38 องศา 4: การขยาย 39 องศา 5: การขยาย 40 องศา )
2.ประสิทธิภาพการตรวจจับ
ความไว:
(ภาพ A: ผลลัพธ์ของ MIRA นำเสนอโดยใช้ agarose gel electrophoresis)
(รูป B: ผลลัพธ์ PCR แบบซ้อนนำเสนอโดยใช้ agarose gel electrophoresis)
(รูปที่ C: ผลลัพธ์ของ MIRA นำเสนอโดยใช้แถบทดสอบกรดนิวคลีอิก)
ตัวอย่างถูกนำไปเจือจางแบบอนุกรม 10 เท่าโดยเริ่มต้นที่ 3.23×10⁶ สำเนา/ไมโครลิตร PCR แบบซ้อนที่มี agarose gel electrophoresis สามารถตรวจจับสำเนา 3.23×10²/μL ได้อย่างเสถียร MIRA ที่มีอะกาโรสเจลอิเล็กโทรโฟเรซิสและ MIRA ที่มีแถบทดสอบกรดนิวคลีอิกสามารถตรวจจับสำเนาที่ 3.23×10¹/μL ได้อย่างเสถียร
วิธี MIRA แสดงความไวที่สม่ำเสมอโดยใช้รูปแบบการนำเสนอผลลัพธ์ที่แตกต่างกันสองรูปแบบ และความไวของวิธี MIRA นั้นเหนือกว่าวิธี PCR แบบซ้อน
ความจำเพาะ:
(1: FeChPV, chaphamaparvovirus ในแมว; 2: FPV, ไวรัส panleukopenia ในแมว; 3: FeAstV, แอสโตรไวรัสในแมว; 4: FBoV, bocavirus ในแมว; 5: CachaV, chaparvovirus ในสุนัข; 6: กลุ่มควบคุมเชิงลบ)
วิธี MIRA-LFD ที่จัดตั้งขึ้นใหม่ตรวจพบเฉพาะ FeChPV และไม่แสดงปฏิกิริยาข้าม-กับไวรัสอ้างอิงอื่นๆ ซึ่งบ่งชี้ถึงความจำเพาะที่ดี
3.สรุปการศึกษา
การศึกษานี้ได้กำหนดวิธีการ MIRA-LFD สำหรับการตรวจจับ FeChPV โดยไม่จำเป็นต้องใช้เครื่องมือที่มีความแม่นยำสูง- เนื่องจากเป็นวิธีการตรวจจับที่มีประสิทธิภาพ ประหยัด และเชื่อถือได้ โดยมีความไวและความจำเพาะสูง วิธี MIRA-LFD จึงเหมาะสมกว่าสำหรับการตรวจหาทางคลินิก โดยให้การสนับสนุนทางเทคนิคสำหรับการป้องกันและควบคุมการติดเชื้อ FeChPV ตั้งแต่เนิ่นๆ
4.AMP-เทคโนโลยีชีวภาพแห่งอนาคต
การขยายกรดนิวคลีอิกอย่างรวดเร็วโดยไอโซเทอร์มอลของ MIRA เป็นเทคโนโลยีที่ช่วยให้การตรวจจับอย่างรวดเร็วบนไซต์-ได้อย่างแท้จริง
เทคโนโลยี MIRA ขึ้นอยู่กับกลไกการซ่อมแซมการรวมตัวกันของยีนในร่างกาย โดยอาศัยการทำงานร่วมกันของโปรตีนเชิงฟังก์ชันหลายชนิดที่อุณหภูมิห้อง เพื่อให้ได้กรดนิวคลีอิกที่รวดเร็ว (5-20 นาที) มีความละเอียดอ่อน เฉพาะเจาะจง และปลอดภัยที่อุณหภูมิห้อง (25 องศา –45 องศา) เนื่องจากเทคโนโลยี MIRA มีอุณหภูมิคงที่ จึงมีความต้องการอุปกรณ์ต่ำและใช้งานง่าย ด้วยอุปกรณ์พกพาขนาดเล็ก สามารถนำไปใช้ในการทดสอบระดับแนวหน้าในสถานการณ์การใช้งานที่หลากหลาย นำการทดสอบกรดนิวคลีอิกที่รวดเร็วและแม่นยำมาสู่การตั้งค่า เช่น POCT การทดสอบที่บ้าน พื้นที่เกษตรกรรม และ-การบังคับใช้กฎหมายในสถานที่ทำงาน จากเทคโนโลยี MIRA เทคโนโลยีชีวภาพแห่งอนาคตของ Amp- ได้พัฒนาชุดผลิตภัณฑ์การทดสอบแบบรวดเร็วบน-ไซต์ ซึ่งรวมถึงสารปล่อยกรดนิวคลีอิกอย่างรวดเร็ว สารรีเอเจนต์ในการขยายกรดนิวคลีอิกอย่างรวดเร็วแบบไอโซเทอร์มอล แถบทดสอบทองคำคอลลอยด์ และอุปกรณ์พกพาขนาดจิ๋ว ทำให้เกิดโซลูชันโดยรวมสำหรับ-การทดสอบโมเลกุลอย่างรวดเร็วบนไซต์ นอกจากนี้ เทคโนโลยี MIRA ของ Amp-future ยังมอบข้อได้เปรียบในการใช้งานเมื่อรวมกับเทคโนโลยี CRISPR, NGS, SNP, ไมโครฟลูอิดิก และอื่นๆ อีกมากมาย
นอกเหนือจากชุดผลิตภัณฑ์การทดสอบอย่างรวดเร็วบนไซต์-ที่แสดงด้านบนแล้ว Amp-future Biotech ยังให้บริการ:
รีเอเจนต์การวิจัย:จัดหาวัตถุดิบรีเอเจนต์และการสนับสนุนด้านเทคนิคสำหรับการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ขั้นพื้นฐาน ตลอดจนเอกสารอ้างอิงของโครงการ
การผลิตแบบ OEM:สามารถผลิตผลิตภัณฑ์สำเร็จรูปที่มีความบริสุทธิ์สูง-และมีกิจกรรมสูงโดยอิสระตลอดกระบวนการทั้งหมด ทำให้บรรลุการผลิตในระดับอุตสาหกรรม-
โครงการที่ได้รับมอบหมายให้พัฒนา:ข้อมูลลำดับและผลการวิเคราะห์การจัดตำแหน่งตามลำดับ การออกแบบไพรเมอร์โครงการ-และการสังเคราะห์โพรบ การสังเคราะห์พลาสมิดของโครงการและตัวอย่าง รายงานและผลลัพธ์ของโครงการ ฯลฯ
หากต้องการข้อมูลเพิ่มเติมสามารถสอบถามได้ที่