Staphylococcus haemolyticus เป็นแบคทีเรีย coagulase-negative แกรมบวกที่พบได้บ่อยในโรงพยาบาล ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมาการติดเชื้อที่โรงพยาบาลได้รับความสนใจเพิ่มขึ้นเนื่องจากความเสี่ยงที่สูงขึ้น Staphylococcus haemolyticus สามารถทำให้เกิดการติดเชื้อที่ผิวหนัง, เยื่อหุ้มสมองอักเสบ, เยื่อบุช่องท้องอักเสบและแม้กระทั่งการติดเชื้อ ความล่าช้าในการวินิจฉัยทางคลินิกสามารถนำไปสู่สถานะสุขภาพที่เลวร้ายลงดังนั้นการวินิจฉัยอย่างรวดเร็วของ S. haemolyticus จึงเป็นกุญแจสำคัญในการรักษาที่แม่นยำ
ทีมวิจัยของอาจารย์ Ji Tuo จากแผนกห้องปฏิบัติการกลางของโรงพยาบาล People ของ Lianyungang ประเทศจีนตีพิมพ์บทความ "การตรวจจับอย่างรวดเร็วและภาพของ Staphylococcus haemolyticus ในตัวอย่างทางคลินิกที่มี Mira-LFS" ในวารสาร "Analytica chimica acta"
1. ภาพรวมการค้นหา
ในการศึกษานี้มีวิธีการ MIRA-LFS ที่ใช้ยีน MVAA เพื่อตรวจจับ Staphylococcus haemolyticus เทคโนโลยีการขยายกรดนิวคลีอิกแบบหลายเอนไซม์ isothermal อย่างรวดเร็ว MIRA ถูกรวมเข้ากับ LFS ทดสอบการไหลด้านข้าง LFS เพื่อให้ได้การตรวจจับเชื้อโรคอย่างรวดเร็ว
การทดลองดำเนินการที่ 37 องศาและสามารถตรวจพบผลลัพธ์ภายใน 9 นาที ความไวของการตรวจจับคือ 0. 147cfu/ปฏิกิริยา
วิธีการตรวจจับ MIRA-LFS เหมาะสำหรับการตรวจจับจุดคงที่ของ Staphylococcus hemolyticus ในตัวอย่างทางคลินิกตระหนักถึงวิธี POCT สำหรับการระบุ Staphylococcus hemolyticus ซึ่งมีค่ามากสำหรับการวินิจฉัยโรคอย่างรวดเร็วและการรักษาในพื้นที่ที่มีบริการทางการแพทย์
ทีมวิจัยใช้ MIRA-LFS, QPCR และวิธีการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียแบบดั้งเดิมเพื่อวิเคราะห์ตัวอย่างทางคลินิกแบบสุ่ม 95 ตัวอย่างและยืนยันการบังคับใช้ทางคลินิก
2. วิธีการวิจัย
แผนผังไดอะแกรมของการตรวจจับ MIRA-LFS แสดงไว้ด้านบน
การวิจัยใช้ DNA ของ AMP-FUTURE BITECH BIOTECH ของชุดเครื่องขยายเสียงอย่างรวดเร็ว (ประเภทแถบทดสอบทองคำคอลลอยด์) และแถบทดสอบการตรวจจับกรดนิวคลีอิก
ความยาวไพรเมอร์ยีน MVAA คือ 30-35 นิวคลีโอไทด์และความยาวของผลิตภัณฑ์ขยายคือ 100-350 bp ไพรเมอร์ผู้สมัครทั้งหมด 6 คู่ได้รับการออกแบบ การวิเคราะห์ MIRA ดำเนินการโดยใช้ GDNA ของสายพันธุ์ staphylococcus hemolyticus มาตรฐานไพรเมอร์ของผู้สมัครได้รับการคัดเลือกและผลิตภัณฑ์ขยายถูกแสดงโดยใช้ agarose gel electrophoresis 2%
จากนั้นออกแบบโพรบตามลำดับไพรเมอร์ไปข้างหน้า (ขยาย 16 bp ย้อนหลัง) จุดสิ้นสุด 5 'ของโพรบถูกระบุด้วย FITC และปลาย 3' ถูกระบุด้วยการปิดกั้น C3 ใช้ THF เพื่อแทนที่ 31 นิวคลีโอไทด์ในโพรบ THF คือ 30 bp จากปลาย 5 'และ 15 bp จากปลาย 3' จุดสิ้นสุด 5 'ของไพรเมอร์ย้อนกลับที่เลือกนั้นมีป้ายกำกับด้วยไบโอติน
ยิ่งไปกว่านั้นทีมวิจัยได้เพิ่มประสิทธิภาพการเกิดปฏิกิริยาสำหรับการตรวจจับ MIRA-LFS ของ Staphylococcus hemolyticus ทดสอบที่ 37 องศาเป็นระยะเวลา 2 นาทีจาก 4 ถึง 12 นาที ผลลัพธ์จะปรากฏขึ้นที่เวลาตอบสนอง 8 นาทีและสามารถมองเห็นสายทดสอบได้อย่างชัดเจน นอกจากนี้การทดสอบจะดำเนินการเป็นระยะ 5 องศาจาก 22-52 องศา 37-42 องศาเป็นอุณหภูมิที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการตรวจจับ MIRA-LFS ดังนั้นเวลาตอบสนองที่ดีที่สุดและอุณหภูมิของวิธี MIRA-LFS สำหรับ Staphylococcus haemolyticus คือ 8 นาทีและ 37 องศาตามลำดับ เมื่อรวมกับผลลัพธ์สุดท้ายที่ถูกมองเห็นโดย LFs ภายใน 1 นาทีเวลาในการตรวจจับทั้งหมดคือ 9 นาที
3. ผลการศึกษา
การตรวจสอบความไว
การทดสอบ MIRA-LFS ได้ดำเนินการกับความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ DNA จีโนม (gDNA) ที่ได้จากวัฒนธรรม staphylococcus haemolyticus เจือจางแบบอนุกรม (1 0^6-10^0 cfu/ml)
การวิเคราะห์การถดถอยของหน่วยความน่าจะเป็นแสดงให้เห็นว่า 95% LOD ที่กำหนดโดยการทดสอบ MIRA-LFS คือ 0. 147 CFU/ปฏิกิริยา
การตรวจสอบความจำเพาะ
โดยการวิเคราะห์สายพันธุ์จุลินทรีย์ที่เกิดจากการเกิดโรค 18 สายพันธุ์และสายพันธุ์ Staphylococcus haemolyticus ทางคลินิก 15 สายพันธุ์การเลือกของการตรวจหา miRA-LFS ของ Staphylococcus haemolyticus ถูกกำหนด ผลการศึกษาพบว่าการทดสอบ MIRA-LFS นั้นเป็นค่าลบสำหรับแบคทีเรียที่ทำให้เกิดโรค 18 ชนิดและเป็นบวกสำหรับตัวอย่างทางคลินิก 15 ตัวอย่างของ Staphylococcus haemolyticus
การตรวจจับ MIRA-LFS นั้นเลือกอย่างสูงและเหมาะสำหรับการคัดกรอง Staphylococcus hemolyticus
การทดสอบตัวอย่างจริง
Lianyungang โรงพยาบาลคนที่สองเก็บตัวอย่าง 95 ตัวอย่างรวมถึงตัวอย่างผิวหนังและเนื้อเยื่ออ่อน 35 ตัวอย่างตัวอย่างปัสสาวะ 16 ตัวอย่าง 14 ตัวอย่างเสมหะและตัวอย่างเลือด 30 ตัวอย่าง
ผลการศึกษาพบว่าวิธีการตรวจจับนั้นสอดคล้องกับวิธี qPCR 100% นอกจากนี้เมื่อเปรียบเทียบกับมาตรฐานทองคำ (GB/T4789. 11-2003) ความไวและความจำเพาะของวิธีการตรวจจับ MIRA-LFS สำหรับการระบุการติดเชื้อ Staphylococcus hemolyticus staphylococcus คือ 100% และ 98.73% ตามลำดับ ผลลัพธ์เหล่านี้ตรวจสอบเพิ่มเติมเกี่ยวกับความเป็นไปได้ทางเทคนิคของวิธีนี้ในการตรวจจับ Staphylococcus hemolyticus ในตัวอย่างทางคลินิก
วิธี MIRA-LFS ใช้สำหรับการตรวจจับ POCT อย่างรวดเร็วของ Staphylococcus hemolyticus มันมีประสิทธิภาพแม่นยำง่ายและราคาถูกและช่วยในการตัดสินใจวินิจฉัยและการรักษาอย่างรวดเร็ว
เรียนรู้เกี่ยวกับเทคโนโลยี Mira
isothermal isothermal isothermal อย่างรวดเร็วของ AMP-FUTURE เทคโนโลยีการขยายกรดนิวคลีอิกแอมพลิฟายเออร์ขยายกรดนิวคลีอิกที่อุณหภูมิคงที่ 39 องศา -42 ระดับโดยใช้เวลาตอบสนองเพียง 5-20 นาที นอกจากนี้ยังไม่จำเป็นต้องมีเงื่อนไขทางห้องปฏิบัติการที่เข้มงวดและสถานการณ์การใช้งานมีความหลากหลาย: แผนกห้องปฏิบัติการของโรงพยาบาลทั่วไปการดูแลเบื้องต้นการทดสอบบ้านทุ่งนา ฯลฯ
รูปแบบผลิตภัณฑ์รีเอเจนต์มีความหลากหลาย: ผงแห้งเยือก, ไมโครสเฟียร์แห้งแห้ง ฯลฯ ; ผลการแสดงผลมีความหลากหลาย: เจลอิเล็กโทรโฟเรซิส, เส้นโค้งฟลูออเรสเซนต์, แถบทดสอบทองคำคอลลอยด์ ฯลฯ รีเอเจนต์มีประสิทธิภาพที่เสถียรใช้งานง่ายและสะดวกสำหรับการจัดเก็บและการขนส่ง
ด้วย MIRA ในฐานะเทคโนโลยีหลักของแพลตฟอร์มมันได้พัฒนาชุดของผลิตภัณฑ์สนับสนุนเช่น "เทคโนโลยีการปลดปล่อยกรดนิวคลีอิกที่เร็วเป็นพิเศษ", "เครื่องตรวจจับฟลูออเรสเซนซ์แบบสองช่องทาง", "ระบบตรวจจับแบบปิดอัตโนมัติแบบบูรณาการ", "อุปกรณ์ตรวจจับกรดนิวคลีอิกที่ทดสอบด้วยตนเอง"