ชุดเครื่องขยายเสียง RNA isothermal สามารถใช้สำหรับการตรวจจับการประกบทางเลือกของ RNA ได้หรือไม่?
ในสนามแบบไดนามิกของชีววิทยาโมเลกุลการสำรวจการประกบทางเลือก RNA ได้กลายเป็นพื้นที่สำคัญของการศึกษา การประกบทางเลือกเป็นกระบวนการที่ exons ของ pre - messenger RNA (pre - mRNA) เข้าร่วมในชุดค่าผสมที่แตกต่างกันนำไปสู่การผลิต isoforms หลาย mRNA จากยีนเดียว ปรากฏการณ์นี้เพิ่มความซับซ้อนของโปรตีนและมีบทบาทสำคัญในกระบวนการทางชีวภาพต่าง ๆ เช่นการพัฒนาความแตกต่างและความก้าวหน้าของโรค ในขณะเดียวกันชุดเครื่องขยายเสียง RNA isothermal ได้กลายเป็นเครื่องมือที่ทรงพลังในการตรวจจับกรดนิวคลีอิกเนื่องจากความเรียบง่ายความรวดเร็วและความสามารถในการทำปฏิกิริยาที่อุณหภูมิคงที่ ในฐานะซัพพลายเออร์ของชุดการขยายความร้อนของ RNA isothermal เรามักจะได้รับการสอบถามเกี่ยวกับว่าชุดอุปกรณ์ของเราสามารถใช้อย่างมีประสิทธิภาพในการตรวจจับการประกบทางเลือกของ RNA หรือไม่
ประการแรกเรามาทำความเข้าใจกับหลักการทำงานของ RNA isothermal amplification ชุดอุปกรณ์เหล่านี้ได้รับการออกแบบมาเพื่อขยายลำดับ RNA เฉพาะภายใต้สภาวะอุณหภูมิคงที่ไม่จำเป็นต้องใช้การหมุนเวียนอุณหภูมิที่จำเป็นในปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบดั้งเดิม (PCR) มีวิธีการขยายความร้อนใต้พิภพที่รู้จักกันดีหลายวิธีเช่นการขยายความร้อนใต้พิภพแบบวนซ้ำ (LAMP), ลำดับกรดนิวคลีอิก - การขยายตาม (NASBA) และ recombinase polymerase amplification (RPA) ตัวอย่างเช่นในหลอดไฟไพรเมอร์ได้รับการออกแบบมาเพื่อรับรู้หกภูมิภาคที่แตกต่างกันใน RNA เป้าหมายและ DNA polymerase ที่มีกิจกรรมการกระจัดถูกใช้เพื่อสังเคราะห์ DNA ที่อุณหภูมิคงที่ประมาณ 60 - 65 ° C สิ่งนี้ส่งผลให้เกิดการสะสมอย่างรวดเร็วของผลิตภัณฑ์ขยายที่สามารถตรวจพบได้ด้วยวิธีการต่าง ๆ รวมถึงการเรืองแสงและความขุ่น
เมื่อพูดถึงการตรวจจับการประกบทางเลือกเป้าหมายคือการแยกแยะความแตกต่างระหว่าง isoforms mRNA ที่แตกต่างกันที่เกิดจากยีนเดียวกัน กุญแจสำคัญในการออกแบบไพรเมอร์ที่เหมาะสมซึ่งสามารถกำหนดเป้าหมายการเชื่อมต่อที่ไม่ซ้ำกันของแต่ละไอโซฟอร์ม ในทางทฤษฎีแล้ว RNA isothermal Amplification Amplification สามารถใช้งานได้อย่างดีสำหรับงานนี้ ความไวสูงของวิธีการขยายความร้อนใต้พิภพช่วยให้สามารถตรวจจับไอโซฟอร์ม mRNA ที่มีความอุดมสมบูรณ์ต่ำได้ นอกจากนี้ความสามารถในการทำปฏิกิริยาที่อุณหภูมิคงที่ทำให้เทคนิคเข้าถึงได้ง่ายขึ้นและมีข้อผิดพลาดน้อยลง - มีแนวโน้มที่จะเปรียบเทียบกับ PCR โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการตั้งค่าที่อุปกรณ์ปั่นจักรยานความร้อนที่ซับซ้อนไม่สามารถใช้ได้
เรานำเสนอชุดอุปกรณ์ขยายความร้อนของ RNA isothermal ที่สามารถนำไปใช้กับการตรวจจับการประกบทางเลือก ที่MIRA RNA isothermal AMPLIFICATION RAPID AMPLIFICEเป็นตัวเลือกที่สะดวก มันใช้แถบทดสอบสำหรับการตรวจจับภาพของผลิตภัณฑ์ที่ขยายซึ่งเป็นประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการคัดกรองที่รวดเร็วและบน - ไซต์ ชุดนี้สามารถใช้ในการออกแบบไพรเมอร์ที่กำหนดเป้าหมายการเชื่อมต่อการประกบที่แตกต่างกันและผลลัพธ์สามารถรับได้ภายในระยะเวลาอันสั้น วิธีการตรวจจับแถบทดสอบนั้นง่ายและไม่จำเป็นต้องใช้อุปกรณ์ในห้องปฏิบัติการที่ซับซ้อนทำให้ผู้ใช้สามารถเข้าถึงได้ในวงกว้าง
อีกทางเลือกหนึ่งคือMira RNA isothermal AMPLIFICATION KIT FLUORESCENCES - II- ชุดนี้ใช้การตรวจจับจากฟลูออเรสเซนต์ซึ่งให้ผลลัพธ์เชิงปริมาณและละเอียดอ่อนมากขึ้น สีย้อมฟลูออเรสเซนต์รวมอยู่ในปฏิกิริยาการขยายและการเพิ่มขึ้นของความเข้มของฟลูออเรสเซนต์นั้นเป็นสัดส่วนกับปริมาณของผลิตภัณฑ์ที่ขยาย ด้วยการออกแบบไพรเมอร์เฉพาะกับตัวแปรการประกบที่แตกต่างกันชุดนี้สามารถหาปริมาณความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของแต่ละไอโซฟอร์มในตัวอย่างได้อย่างแม่นยำ สิ่งนี้มีความสำคัญอย่างยิ่งในการวิจัยที่การทำความเข้าใจระดับการแสดงออกของไอโซฟอร์มที่แตกต่างกันเป็นสิ่งสำคัญเช่นในการศึกษากลไกโมเลกุลของโรค
หนึ่งในความท้าทายหลักในการใช้ชุดอุปกรณ์ขยายความร้อนของ RNA isothermal สำหรับการตรวจจับการประกบทางเลือกคือการออกแบบไพรเมอร์ เนื่องจากเหตุการณ์การประกบทางเลือกสามารถเกิดขึ้นได้ในรูปแบบที่หลากหลายการแยกการประกบกันจึงค่อนข้างซับซ้อน การออกแบบไพรเมอร์จำเป็นต้องคำนึงถึงไม่เพียง แต่ความจำเพาะลำดับของทางแยกการประกบกัน แต่ยังรวมถึงโครงสร้างรองของ RNA เป้าหมาย การออกแบบไพรเมอร์ที่ไม่ถูกต้องสามารถนำไปสู่การขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจงการทำปฏิกิริยาข้ามระหว่างไอโซฟอร์มที่แตกต่างกันหรือความล้มเหลวในการขยาย isoform เป้าหมาย เพื่อเอาชนะความท้าทายเหล่านี้เครื่องมือชีวสารสนเทศศาสตร์ขั้นสูงสามารถใช้ในการทำนายโครงสร้างรองของ RNA เป้าหมายและการออกแบบไพรเมอร์ที่ดีที่สุดที่มีความจำเพาะสูง
นอกเหนือจากการออกแบบไพรเมอร์แล้วการเตรียมตัวอย่างก็มีความสำคัญเช่นกัน การสกัด RNA ที่มีคุณภาพสูงเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อให้แน่ใจว่ามีความสมบูรณ์ของไอโซฟอร์ม mRNA สารปนเปื้อนในตัวอย่าง RNA เช่น DNA จีโนมโปรตีนและเกลือสามารถรบกวนปฏิกิริยาการขยาย ดังนั้นควรใช้วิธีการสกัด RNA และวิธีการทำให้บริสุทธิ์ก่อนที่จะใช้ชุดเครื่องขยายเสียง RNA isothermal
นอกจากนี้การตรวจสอบความถูกต้องเป็นขั้นตอนสำคัญ เมื่อใช้ชุดเครื่องขยายเสียง RNA isothermal เพื่อตรวจจับการประกบทางเลือกผลลัพธ์ควรตรวจสอบความถูกต้องโดยใช้เทคนิคอื่น ๆ เช่นย้อนกลับ - การถอดรหัสเชิงปริมาณ PCR (RT - QPCR) หรือการจัดลำดับ RNA RT - QPCR เป็นวิธีที่ดีสำหรับการหาปริมาณระดับ mRNA และสามารถใช้เพื่อยืนยันผลลัพธ์ที่ได้จากการขยายความร้อน ในทางกลับกันการจัดลำดับ RNA ให้มุมมองที่ครอบคลุมของ transcriptome ซึ่งช่วยให้สามารถระบุเหตุการณ์การประกบกันใหม่และการตรวจสอบความถูกต้องของสิ่งที่รู้จัก
ลองพิจารณาแอปพลิเคชั่นที่ใช้งานได้จริงที่ RNA isothermal amplification ชุดสำหรับการตรวจจับการประกบทางเลือกอาจเป็นประโยชน์ ในการวิจัยโรคมะเร็งการประกบทางเลือกมักจะ dysregulated และ isoforms splicing เฉพาะสามารถทำหน้าที่เป็น biomarkers สำหรับการวินิจฉัยโรคมะเร็งการพยากรณ์โรคและการตอบสนองการรักษา ตัวอย่างเช่นในมะเร็งเต้านมบางชนิดการต่อยีนบางชนิดของยีนที่สำคัญมีความสัมพันธ์กับการพยากรณ์โรคที่ไม่ดี ด้วยการใช้ชุดการขยายความร้อนของ MIRA RNA ของเรานักวิจัยสามารถตรวจจับสายพันธุ์การประกบเหล่านี้ได้อย่างรวดเร็วและแม่นยำในตัวอย่างเนื้องอกซึ่งอาจนำไปสู่กลยุทธ์การรักษาที่เป็นส่วนตัวมากขึ้น
ในการพัฒนาชีววิทยาการประกบทางเลือกมีบทบาทสำคัญในการแยกความแตกต่างของเซลล์และการพัฒนาเนื้อเยื่อ การตรวจจับการเปลี่ยนแปลงในรูปแบบการประกบในระหว่างการพัฒนาสามารถให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับกลไกโมเลกุลที่เป็นพื้นฐานของกระบวนการเหล่านี้ RNA isothermal amplification kits สามารถใช้ในการตรวจสอบการแสดงออกของ isoforms splicing ที่แตกต่างกันในขั้นตอนการพัฒนาที่แตกต่างกันหรือชนิดของเซลล์ช่วยอำนวยความสะดวกในการทำความเข้าใจเกี่ยวกับการควบคุมทางโลกและเชิงพื้นที่ของการแสดงออกของยีน
ในฐานะซัพพลายเออร์เราให้การสนับสนุนทางเทคนิคที่ครอบคลุมสำหรับการใช้ชุดอุปกรณ์ขยายความร้อน RNA ของเราในบริบทของการตรวจจับการประกบทางเลือก ทีมงานด้านเทคนิคของเราสามารถช่วยในการออกแบบไพรเมอร์การเพิ่มประสิทธิภาพของเงื่อนไขการเกิดปฏิกิริยาและการแก้ไขปัญหา นอกจากนี้เรายังจัดหาสื่อการฝึกอบรมและการสัมมนาผ่านเว็บเพื่อช่วยให้ผู้ใช้เข้าใจการทำงานของชุดอุปกรณ์ของเราได้ดีขึ้น
โดยสรุปชุดการขยายความร้อนของ RNA isothermal มีศักยภาพที่ดีในการตรวจจับการประกบทางเลือกของ RNA ความเรียบง่ายความรวดเร็วและความไวของพวกเขาทำให้พวกเขาเป็นเครื่องมือที่มีค่าในการศึกษาเหตุการณ์ประกบกัน ที่Mira DNA isothermal Amplification Amplification Kit Fluorescence-MIRA RNA isothermal AMPLIFICATION RAPID AMPLIFICE, และMira RNA isothermal AMPLIFICATION KIT FLUORESCENCES - IIเสนอตัวเลือกการตรวจจับที่แตกต่างกันเพื่อตอบสนองความต้องการด้านการวิจัยที่หลากหลาย
หากคุณมีความสนใจในการใช้ชุดเครื่องขยายเสียง RNA isothermal ของเราสำหรับการตรวจจับการประกบทางเลือกในการวิจัยของคุณเราขอเชิญคุณติดต่อเราเพื่อขอข้อมูลเพิ่มเติมและเพื่อหารือเกี่ยวกับข้อกำหนดเฉพาะของคุณ ทีมงานของเราทุ่มเทเพื่อให้คุณมีผลิตภัณฑ์ที่มีคุณภาพสูงและบริการที่ยอดเยี่ยมเพื่อสนับสนุนความพยายามทางวิทยาศาสตร์ของคุณ
ข้อมูลอ้างอิง:
- Notomi T, Okayama H, Masubuchi H, et al. ลูป - การขยายความร้อนใต้พิภพของ DNA กรดนิวคลีอิก 2000; 28 (12): E63
- Compton J. ลำดับกรดนิวคลีอิก - การขยายตาม ธรรมชาติ. 1991; 350 (6313): 91 - 92
- Piepenburg O, Williams CH, Stemple DL, Armes NA การตรวจจับ DNA โดยใช้โปรตีนรวมตัวกันอีกครั้ง plos biol 2549; 4 (7): E204
- Wang ET, Sandberg R, Luo S, et al. การควบคุมไอโซฟอร์มทางเลือกในเนื้อเยื่อของมนุษย์ transcriptomes ธรรมชาติ. 2008; 456 (7221): 470 - 476